PEG1450溶液(50%,無(wú)菌)

【PEG1450溶液(50%,無(wú)菌)】操作步驟_注意事項(xiàng)_簡(jiǎn)介信息

【信息說(shuō)明】

產(chǎn)品名稱：PEG1450溶液(50%,無(wú)菌)

供應(yīng)商：遠(yuǎn)慕生化試劑廠家

規(guī)格：10ml 5×10ml

分類：細(xì)胞培養(yǎng)

儲(chǔ)存條件：4℃,6個(gè)月

用途：聚乙二醇可用作融合劑，以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞雜交，同SigmaP7181。

注意事項(xiàng)：無(wú)菌溶液，由DPBS(pH7.4)和PEG1450或稱聚乙烯醇1450組成,經(jīng)過(guò)濾除菌。

【操作步驟】

1、 如果變成膠凍狀,可37~60℃水浴使其變成溶液。

2、單層貼壁細(xì)胞:將雜交前體細(xì)胞以相同數(shù)量(5×104/ml)接種，以適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,待細(xì)胞貼壁擴(kuò)展至匯合成片(80%匯合率)的密度；吸干培養(yǎng)液，加入 PEG1450溶液(50%,無(wú)菌)，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)1min使PEG1450溶液覆蓋所有細(xì)胞。

3、靜置1min：加入完全MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1450溶液，吸干凈稀釋的PEG1450溶液，再用5ml MEM培養(yǎng)液洗滌被PEG處理的細(xì)胞；吸干凈洗液，加入 MEM培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)過(guò)夜。24~48h后先吸去培養(yǎng)液，加入胰酶消化液處理細(xì)胞，待細(xì)胞消化后吸除胰酶消化液，用HAT選擇培養(yǎng)剔除HPRT和TK缺陷細(xì)胞。

4、棄上清液：用補(bǔ)加1×HT和1×A的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞；融合后進(jìn)行異核體分析，雜交前體細(xì)胞在4~5天內(nèi)發(fā)生死亡，對(duì)于大多數(shù)融合前體細(xì)胞而言，可見(jiàn)雜交細(xì)胞克隆。

5、懸浮細(xì)胞：將兩種不同親體的細(xì)胞各1ml(約為1×107)混勻，離心以沉淀雜交前體細(xì)胞，棄上清液，使之剩余約1ml，手指輕彈管底或手搖離心管使兩種細(xì)胞混勻并重新懸??；在離心管中加入1ml PEG1450溶液(50%,無(wú)菌)，置于37℃水浴，加入提前37℃預(yù)熱的含10%胎牛血清的MEM培養(yǎng)液，使PEG1450稀釋并停止作用。

6、離心：棄上清液,加入5ml完全MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1450溶液，吸干凈稀釋的PEG1450溶液；用5ml無(wú)血清MEM培養(yǎng)液，手搖離心管重懸細(xì)胞(不要破壞細(xì)胞)，1000g離心5min，棄上清液,重復(fù)1次該步驟。

7、加入含有胎牛血清的HAT選擇培養(yǎng)基，混勻；將細(xì)胞懸液用培養(yǎng)液稀釋至5×104/ml，接種于96孔板，37℃ 5%CO2孵育過(guò)夜24~48h后選出融合細(xì)胞。

【注意事項(xiàng)】

1、 應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免被微生物污染。

2、 PEG1450溶液較為粘稠時(shí)，可37~60℃水浴使其變成溶液。

3、 體外培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞均可做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細(xì)胞。

4、 如需HAT選擇系列產(chǎn)品，可選擇Leagene A Media Supplement(50×)、HT MediaSupplement(50×)、HAT Media Supplement(50×)。

【簡(jiǎn)介說(shuō)明】

PEG1450溶液(50%,無(wú)菌)主要由PEG1450(CAS號(hào)25322-68-3)、磷酸鹽等組成，其作用原理使能夠改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，兩細(xì)胞接口處在雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用下，細(xì)胞發(fā)生融合。
PEG1450溶液(50%,無(wú)菌)可用作融合劑，以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞雜交，僅用于科研領(lǐng)域，不用于臨床診斷或治療。

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