關(guān)于標(biāo)簽抗體你了解多少呢?

標(biāo)簽抗體，別名為抗原表位，又稱抗原決定簇，是抗原分子中決定抗原特異性的特殊區(qū)域或基團(tuán)，是與抗體特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)或序列。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，科研人員可以通過(guò)DNA重組技術(shù)，構(gòu)建包含目的基因以及表位標(biāo)記的融合蛋白，進(jìn)而通過(guò)特異性標(biāo)簽抗體對(duì)其鑒定與純化，以達(dá)到研究的需求。常用的標(biāo)簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。

1. Flag標(biāo)簽—抗Flag標(biāo)簽抗體

Flag標(biāo)簽系統(tǒng)是利用一個(gè)短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標(biāo)蛋白。Flag標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞類型，包括細(xì)菌、酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞等，相應(yīng)的Flag標(biāo)簽抗體也被廣泛應(yīng)用。由于Flag標(biāo)簽系統(tǒng)的純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。Flag標(biāo)簽可以通過(guò)加入腸激酶處理去除，腸激酶專一識(shí)別該肽序列C末端的5個(gè)氨基酸殘基。Flag抗體可以用于檢測(cè)和Flag標(biāo)簽融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測(cè)Flag融合表達(dá)蛋白等。

2.His標(biāo)簽—抗His標(biāo)簽抗體

His標(biāo)簽是由6個(gè)組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設(shè)計(jì)用于重組蛋白質(zhì)的吸附純化。由于分子量較小，并且較容易分離和純化，His融合標(biāo)簽與其他標(biāo)簽相比有很多明顯優(yōu)勢(shì)，是目前用于純化的融合標(biāo)簽中使用最為廣泛的一種。利用 His標(biāo)簽可以建立一個(gè)基于融合蛋白的高效檢測(cè)和純化系統(tǒng)。His抗體可以用于檢測(cè)和His標(biāo)簽融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測(cè)His融合表達(dá)蛋白等。

3. GST標(biāo)簽—抗GST標(biāo)簽抗體

GST標(biāo)簽體系具有蛋白表達(dá)產(chǎn)率高、表達(dá)產(chǎn)物純化方便，以及利于GST抗體制備等特點(diǎn)。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細(xì)菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過(guò)親和層析得到。GST融合蛋白可被位點(diǎn)特異性蛋白酶裂解，從而除去GST蛋白。融合蛋白又是一個(gè)非常好的強(qiáng)免疫原，因此，很容易制備抗新蛋白的抗體。正是由于以上的優(yōu)點(diǎn)，商品化的GST融合蛋白表達(dá)體系以及GST標(biāo)簽抗體系統(tǒng)至今仍被廣泛應(yīng)用。近年來(lái)在原核表達(dá)體系中，谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶GST表達(dá)純化系統(tǒng)的應(yīng)用更為普遍。

4. Myc標(biāo)簽—抗Myc標(biāo)簽抗體

Myc標(biāo)簽(序列為:EQKLISEEDL)在WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細(xì)胞術(shù)中均得到成功運(yùn)用，可用于檢測(cè)重組蛋白在細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳細(xì)胞中的表達(dá)情況。Myc重組蛋白質(zhì)可通過(guò)偶聯(lián)Myc標(biāo)簽抗體到二乙烯砜活化的瓊脂糖上而進(jìn)行親和純化。Myc標(biāo)簽可放在C端或N端，但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會(huì)降低蛋白質(zhì)的活力，因此Myc標(biāo)簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于檢測(cè)但很少用于純化。

5. HA標(biāo)簽—抗HA標(biāo)簽抗體

HA標(biāo)簽來(lái)源于人類流感血凝素的98-106位氨基酸，利用一個(gè)HA (influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽融合到目標(biāo)蛋白。HA標(biāo)簽具很強(qiáng)的免疫反應(yīng)性，被廣泛用于HA融合目的蛋白的分離、純化、檢測(cè)和示蹤。重組的HA標(biāo)簽蛋白可以使用偶聯(lián)有HA高特異性單克隆抗體的樹(shù)脂來(lái)完成高效純化。HA標(biāo)簽系統(tǒng)HA標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞類型，相應(yīng)的HA標(biāo)簽抗體也被廣泛應(yīng)用，HA標(biāo)簽抗體能特異識(shí)別C末端或N末端帶有HA標(biāo)簽(HA-tagged)的融合蛋白。

6. GFP標(biāo)簽—抗GFP標(biāo)簽抗體

綠色螢光蛋白(Green Fluorescent Protein)，簡(jiǎn)稱GFP，在藍(lán)色波長(zhǎng)范圍的光線激發(fā)下會(huì)發(fā)出綠色螢光。GFP或其突變體EGFP等被廣泛用于基因表達(dá)效率的檢測(cè)，以及和目的蛋白融合表達(dá)用于檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)和分布。一般來(lái)說(shuō)，GFP抗體不僅可以檢測(cè)GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w，也可以檢測(cè)和GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測(cè)GFP融合表達(dá)蛋白等。